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克隆感受態_快速轉化

爱彩网双色球基本走势图:F-DH5α

文字:[大][中][小] 2016-4-17    瀏覽次數:4412    

双色球蓝球走势图表 www.axdbte.com.cn F-DH5α快速轉化感受態細胞產品說明書




產品規格 (CAT#: DF1001)

F-DH5α:                                                   100μl/支

pUC19 (control vector,10pg/μl):                   10μl

保存條件(保質期):                            -80℃(6個月)



基因型

F-φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) U169 endA1 recA1 hsdR17(rk-,mk+) supE44λ- thi -1 gyrA96 relA1 pho


產品說明

DH5α菌株是實驗室最常用的感受態細胞。 缺失核酸內切酶 (endA),提高了質粒DNA的產量和質量;重組酶缺陷型 (recA)減少插入片段的同源重組概率,保證了插入DNA 的穩定性;lacZΔM15的存在使DH5α可用于藍、白斑篩選。


F-DH5α感受態細胞經特殊工藝制作,無需42℃熱激,37℃孵育步驟,只需冰浴,10min內完成轉化、涂板操作,pUC19質粒檢測轉化效率可達1~5×10 8cfu/μg DNA。


 快速轉化操作方法 (10min)

1. 提前15分鐘將用到的篩選培養基平板拿到37℃預熱。

2. F-DH5α感受態細胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的DNA(質?;蛄硬錚┎⒂檬植Υ駿P管底輕輕混勻,,冰中靜置5分鐘。

3. 用200 μl槍將感受態細胞-DNA混合物轉移到已經37℃預熱的LB培養基上,涂均勻,表面無水漬。

4. 將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養。如果進行藍白斑篩選操作,將平板放37℃培養至少15h。


 快速熱激轉化操作方法 (25min,可提高轉化效率)

1. F-DH5α感受態細胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的DNA (質?;蛄硬?并用手撥打EP管底輕輕混勻,,冰中靜置5分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰上并靜置2分鐘 (晃動會降低轉化效率)。加入700 μl 不含抗生素的LB,37℃,200 rpm 復蘇10分鐘,涂板 (均勻,表面無水漬)。

3. 將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養。如果進行藍白斑篩選操作,將平板放37℃培養至少15h。



注意事項

1. F-DH5α快速轉化感受態細胞也可進行熱激操作,對于>7 kb質粒的構建,為了提高轉化效率可按以下步驟操作:F-DH5α感受態細胞從-80℃拿出,插入冰中,5分鐘后,加入目的DNA并用手撥打EP管底輕輕混勻,冰中靜置20分鐘。42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰中靜置2分鐘。加入700 μl LB,37℃,200 rpm復蘇30分鐘,涂板。

2. 感受態細胞最好在冰中緩慢融化。插入冰中8分鐘內加入目標DNA,不可在冰中放置時間過長,長時間存放會降低轉化效率,混入目的DNA時應輕柔操作。

3. F-DH5α快速轉化感受態細胞涂氨芐/羧芐青霉素抗性平板時效率較高,若涂卡那霉素或其他抗生素平板,轉化效率下降(因無孵育步驟,卡那霉素等對菌體毒性較大)。若要提高卡那霉素或其他抗性質粒的轉化效率,可按熱激轉化操作,增加孵育步驟。

說明書下載

F-DH5α快速轉化感受態細胞產品說明書


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