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克隆感受態_熱激

双色球基本走势图360:Stable

文字:[大][中][小] 2016-4-13    瀏覽次數:3657    

双色球蓝球走势图表 www.axdbte.com.cn                     Stable Chemically Competent Cell 產品說明書 




產品規格(CAT#: DL1080)

Stable:                                                     100μl/支

pUC19 (control vector,10pg/μl):                   10μl

保存條件(保質期):                            -80℃(6個月)


基因型

F' proA+B+ lacIq ?(lacZ)M15 zzf::Tn10 (TetR) ?(ara-leu) 7697 araD139 fhuA ?lacX74 galK16 galE15 e14- Φ80dlacZ?M15 recA1 relA1 endA1 nupG rpsL (StrR) rph spoT1 ?(mrr-hsdRMS -mcrBC


產品說明

Stable菌株是NEB公司開發的高轉化效率菌株,是逆轉錄病毒/慢病毒載體系統推薦使用的菌株,特別適合慢病毒或具有末端重復序列DNA片段的克隆?;蜃楹兄刈槊竢ecA1 rel A1突變,可有效抑制長片段末端重復區的重組,降低錯誤重組的概率;同時含有核酸酶endA1突變,避免了提取質粒過程中核酸酶的污染,大大提高了高純度病毒質粒的產量和質量。lacZΔM15的存在使Stable可用于藍、白斑篩選,此菌株具有四環素和鏈霉素抗性,Stable感受態細胞經特殊工藝制作,pUC19檢測轉化效率>5×108 cfu/μg DNA。 


操作方法

1. Stable感受態細胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,6分鐘后待菌塊融化,加入目的DNA(質?;蛄硬錚┎⒂檬植Υ駿P管底輕輕混勻(避免用槍吸打),冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰上并靜置5分鐘,晃動會降低轉化效率。

3. 向離心管中加入0.9 mL室溫S.O.C.或LB培養基(S.O.C.營養豐富,可提高轉化效率)。

4. 30℃,250 rpm復蘇60分鐘。

           當質粒中含有不穩定片段時,30培養可降低錯誤重組的概率,若轉化control pUC19計算轉化效率

           則需37,225 rpm復蘇60分鐘

5. 篩選平板提前拿出放30℃孵育使平板溫度保持30℃,吸取50-100 μl直接涂篩選平板或5000 rpm離心一分鐘收菌,留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的S.O.C.或LB培養基上。

6. 將平板倒置放于30℃培養20-24小時或37℃過夜培養。

當質粒中含有不穩定片段時,30培養可降低錯誤重組的概率,若轉化control pUC19計算轉化效率,

則需37培養過夜



注意事項

1. 對不穩定DNA片段的克隆或逆轉錄病毒/慢病毒載體的構建,涂板后平板應在30℃培養,以減少發生錯誤重組的概率

2. 制備高純度病毒質粒時,應使用新鮮轉化的平板接菌,新鮮菌液提取質粒,菌液不可低溫保存后使用。

3. 對不穩定的克隆或病毒質粒優先以質粒狀態保存,盡量避免將質粒保存在大腸桿菌細胞中。

4. 感受態細胞最好在冰中緩慢融化。插入冰中10分鐘內加入目標DNA,不可在冰中放置時間過長,長時間存放會降低轉化效率?;烊肽康腄NA時應輕柔操作。

5. 轉化高濃度的質?;蚋咝實牧硬錕上嚶跎僮鈧沼糜諭堪宓木?。





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Stable Chemically Competent Cell 產品說明書


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