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克隆感受態_熱激

双色球ac值走势图彩宝贝:XL10-Gold

文字:[大][中][小] 2015-8-26    瀏覽次數:5135    

双色球蓝球走势图表 www.axdbte.com.cn  XL10-Gold Chemically Competent Cell 產品說明書 

 



產品規格 (CAT#: DL1050)

XL10-Gold:                                              100μl/支

pUC19 (control vector,10pg/μl):                   10μl

保存條件(保質期):                            -80℃(6個月) 


基因型

TetR Δ(mcrA)183 Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)173 endA1 supE44 thi-1 recA1 gyrA96 relA1 lac Hte [F? proAB lacIqZΔM15 Tn10 (TetR) Amy CamR]



產品說明

XL10-Gold是目前轉化效率最高的感受態細胞,由Stratagene開發的特異性用于大質?;蛘涔罅硬鎰蜆菇ㄎ目獾某陡惺芴赴?。XL10-Gold菌株為Hte(high transformation efficiency)基因型,Hte是Stratagene開發的特異性提高感受態轉化效率及大質粒轉化能力的宿主菌基因型,已成功應用于40kd質粒的構建。[Δ(mcrA)183 Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)173]賦予XL10-Gold缺失幾乎所有已知的限制酶切系統;同時缺失核酸內切酶(endA),提高了質粒DNA的產量和質量;重組酶缺陷型(recA)減少插入片段的同源重組概率,保證了插入DNA的穩定性;TetR, CamR賦予菌株四環素和氯霉素抗性;lacIqZΔM15的存在使XL10-Gold可用于藍、白斑篩選。XL10-Gold感受態細胞經特殊工藝制作,pUC19質粒檢測轉化效率>2×10cfu/μg DNA。 


常規操作方法

1. XL10-Gold感受態細胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的DNA (質?;蛄硬? 并用手撥打EP管底輕輕混勻 (避免用槍吸打),冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激35(非常重要——Efficiency decreases sharply when cells are heat-pulsed for <30 seconds or for >40 seconds.,迅速放回冰上并靜置2分鐘,晃動會降低轉化效率。

3. 向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌培養基(2YTLB),混勻后37℃,200rpm復蘇60分鐘。

4. 5000rpm離心一分鐘收菌,留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YTLB培養基上。

5. 將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養。


Stratagene standard protocol

1. Pre-chill a 14-ml BD Falcon polypropylene round-bottom tubes on ice. Preheat NZY+ broth to 42.

2. Thaw the cells on ice. When thawed, gently mix and aliquot 100 μl of cells into the pre-chilled tubes.

3. Add 4 μl of the β-ME(β巰基乙醇)  to the aliquot of cells.

4. Swirl the tubes gently. Incubate the cells on ice for 10 minutes, swirling gently every 2 minutes.

5. Add 0.1-50 ng of the experimental DNA (or 2 μl of a ligation mixture) to the aliquot of cells.

6. Swirl the tubes gently, then incubate the tubes on ice for 30 minutes.

7. Heat-pulse the tubes in a 42 water bath for 30 seconds. The duration of the heat pulse is critical.

8. Incubate the tubes on ice for 2 minutes.

9. Add 0.9 ml of preheated (42) NZY+ broth and incubate the tubes at 37 for 1 hour with shaking at 225-250 rpm.

10. Plate 200 μl of the transformation mixture on LB agar plates containing the appropriate antibiotic (and containing IPTG and X-gal if color screening is desired).

11. Incubate the plates at 37℃ overnight. If performing blue-white color screening, incubate the plates at 37℃ for at least 17 hours to allow color development (color can be enhanced by subsequent incubation of the plates for 2 hours at 4℃).


注意事項

1. 感受態細胞最好在冰中緩慢融化,插入冰中8分鐘內加入目標DNA,不可在冰中放置時間過長,長時間存放會降低轉化效率?;烊脛柿;蛄硬鍤庇η崛岵僮?。

2. 混入質?;蛄硬鍤庇η崛岵僮?。

3. 轉化高濃度的質?;蚋咝實牧硬錕上嚶跎僮鈧沼糜諭堪宓木?。

4. XL10-Gold菌株對 <40 μg/ml氯霉素有抗性,但對100 μg/ml氯霉素敏感。

5.XL10-Gold感受態細胞采用常規轉化方法,轉化效率可達2×10cfu/μg DNA;如果有更高要求,可嘗試Stratagene公司推薦的標準protocol。





說明書下載

XL10-Gold Chemically Competent Cell 產品說明書



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