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克隆感受態_熱激

双色球和值走势图表:TOP10

文字:[大][中][小] 2015-8-26    瀏覽次數:5340    

双色球蓝球走势图表 www.axdbte.com.cn TOP10 Chemically Competent Cell 產品說明書 




產品規格(CAT#: DL1010)

TOP10:                                                     100μl/支

pUC19 (control vector,10pg/μl):                   10μl

保存條件(保質期):                            -80℃(6個月) 


基因型

F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80 lacM15 ΔlacX74 recA1 araΔ139 Δ(ara-leu)7697 galU galK rpsL (StrR) endA1 nup



產品說明

TOP10菌株來源于MC1061菌株,是目前實驗室最常用的感受態細胞之一,基因型與DH10B高度類似 (DH10B為galE15型,而TOP10為galU型)。TOP10生長速度快 (比DH5α快,但比Mach1-T1生長速度慢),10小時可見克隆,recA1和endA1的突變有利于插入DNA的穩定和高純度質粒DNA的提取??捎糜詮菇寺?,藍白斑篩選等實驗。TOP10感受態細胞經特殊工藝制作,pUC19質粒檢測轉化效率>5×108cfu/μg DNA。 


操作方法

1. TOP10感受態細胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的DNA (質?;蛄硬? 并用手撥打EP管底輕輕混勻 (避免用槍吸打),冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰上并靜置2分鐘,晃動會降低轉化效率。

3. 向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌培養基 (2YTLB),混勻后37℃,200 rpm復蘇60分鐘。

4. 5000rpm離心一分鐘收菌,留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YTLB培養基上。

5. 將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養。如果進行藍白斑篩選操作,將平板放37℃培養至少13 h。


注意事項

1. 感受態細胞最好在冰中緩慢融化,插入冰中8分鐘內加入目標DNA,不可在冰中放置時間過長,長時間存放會降低轉化效率。

2. 混入質?;蛄硬鍤庇η崛岵僮?。

3. 轉化高濃度的質?;蚋咝實牧硬錕上嚶跎僮鈧沼糜諭堪宓木?。




說明書下載

TOP10 Chemically Competent Cell 產品說明書


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