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克隆感受態_熱激

双色球基本走势图1:Mach1-T1

文字:[大][中][小] 2015-8-26    瀏覽次數:4284    

双色球蓝球走势图表 www.axdbte.com.cn   Mach1-T1 Chemically Competent Cell 產品說明書 




產品規格(CAT#: DL1015)

Mach1-T1:                                                       100μl/支

pUC19 (control vector,10pg/μl):                         10μl

保存條件(保質期):                                 -80℃(6個月)


基因型

F- φ80(lacZ)ΔM15 ΔlacX74 hsdR(rK- mK+) ΔrecA1398 endA1 tonA


產品說明

Mach1-T1菌株由野生型non-K-12 E. Coli W菌株改造而來,是目前生長速度較快的感受態細胞之一,在平板上 8h可見克隆,缺失核酸內切酶(endA),提高了質粒DNA的產量和質量;重組酶缺陷型(recA1398)減少插入片段的同源重組概率,保證了插入DNA的穩定性;lacZΔM15的存在使Mach1-T1可用于藍、白斑篩??;tonA突變賦予Mach1-T1菌株對噬菌體T1和T5的抗性。Mach1-T1感受態細胞經特殊工藝制作,pUC19質粒檢測轉化效率>109cfu/μg DNA。


操作方法

1. Mach1-T1感受態細胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的DNA (質?;蛄硬? 并用手撥打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打),冰中靜置25分鐘。

2. 42水浴熱激45秒,迅速放回冰中并靜置2分鐘,晃動會降低轉化效率。

3.向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養基 (2YT或LB),混勻后37℃,200 rpm復蘇60分鐘。

4. 5000 rpm離心一分鐘收菌,留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養基上。

5.將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養。如果進行藍白斑篩選操作,將平板放37℃培養至少13小時。


注意事項

1. 感受態細胞最好在冰中緩慢融化,插入冰中8分鐘內加入目標DNA,不可在冰中放置時間過長,長時間存放會降低轉化效率。

2. 混入質?;蛄硬鍤庇η崛岵僮?。

3. 轉化高濃度的質?;蚋咝實牧硬錕上嚶跎僮鈧沼糜諭堪宓木?。


說明書下載

Mach1-T1 Chemically Competent Cell 產品說明書



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